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门冬酰胺酶
门冬酰胺酶
拼音名：Mendongxian’anmei
英文名：Asparaginase
书页号：2000年版二部－40
本品系自埃希氏大肠杆菌(E.coli ASI.357)中提取制备的具有酰氨基水解作用
的酶。按干燥品计算，每1mg蛋白含门冬酰胺酶效价不得低于250单位。
【性状】 本品为白色结晶状粉末；无嗅，无味。
本品在水中易溶，在乙醇和醚中不溶。
【鉴别】 (1)取本品5mg，加水1ml使溶解，加20％氢氧化钠溶液5ml，摇匀,再加1％
硫酸铜溶液1滴，摇匀，溶液呈蓝紫色。
(2)取本品适量，加缓冲液（取浓缩胶缓冲液1.2ml、甘油1.0ml、10％十二烷基硫酸钠
溶液2.0ml、0.5％溴酚蓝溶液0.5ml、β-巯基乙醇0.5ml、水4.8ml，混匀）制成每1ml中约含
250单位的溶液，临用前置水浴中5分钟，放冷，作为供试品溶液；另取门冬酰胺酶对照品适
量，同法的备，作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液各10μl，照电泳法（附录
Ⅴ F第五法 考马斯亮蓝染色）试验，供试品主成分的迁移率应与对照品迁移率一致。
【检查】 酸碱度 取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定(附录Ⅵ Ｈ)，
pH值应为6.5～7.5。
溶液的澄清度与颜色 取本品，加水制成每1ml中含5mg的溶液，溶液应澄清无色。
纯度 取鉴别（2）项下的供试品溶液，将电泳后的凝胶板置薄层扫描仪上，在参比波长
700nm、测定波长580nm处扫描，按峰面积归一化法计算主峰的相对百分含量，不得低于90.0％。
干燥失重 取本品0.1g，置105℃干燥3小时，减失重量不得过5.0％(附录Ⅷ Ｌ)。
重金属 取本品0.5g，依法检查(附录Ⅷ Ｈ第一法),含重金属不得过百万分之二十。
异常毒性 取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含44000单位的溶液。取体重20±1g
的雄性小白鼠5只,分别自尾静脉注射0.5ml,给药后30分钟内不得出现呼吸困难、抽搐症状。
热原 取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含200单位的溶液，依法检查（附录Ⅺ Ｄ），
剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。
降压物质 取本品，依法检查（附录Ⅺ Ｇ）,剂量按猫体重每1kg注射1万单位，应符合规定。
【效价测定】 比活测定 对照溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量，精密
称定，加水制成0.001mol/L溶液。
供试品溶液的制备 取本品约0.1g，精密称定，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)制成每1ml
中约含门冬酰胺酶0.05mg的溶液。
测定法 取试管3支(14×1.2cm)，各加入0.33％门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预
热3分钟,分别于第1管(t0)加入上述磷酸盐缓冲液0.1ml，第2、3管(t)各精密加
入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟，立即加入25％三氯醋酸溶液各0.5
ml,摇匀，分别为空白反应液(t0)和反应液(t)。精密量取t0、t和对照溶液各0.5ml，置
试管中,每份平行做2管，各加水7.0ml及碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g，加水
至100ml，临用前与20％氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml，混匀，另取试管1支，加水7.5
ml及碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管，室温放置15分钟，于450nm的波长处，分别测
定吸收度A0、At和As，计算平均值，按下式计算：
(At-A0)×50×稀释倍数×F
效价(单位/mg)＝──────────────
As×15×称样量(mg)
式中 50为反应常数；
15为反应时间；
F为对照溶液浓度的校正值。
效价单位定义：一个门冬酰胺酶单位相当于在37℃±1℃时每分钟分解门冬酰胺产
生1μmol氨所需的酶量。
蛋白质含量 取本品约20mg，精密称定，照氮测定法（附录Ⅶ Ｄ第二法）测定，将结果乘
以6.25,计算每1mg供试品中蛋白质含量。
比活 按下式计算：
每1mg供试品的效价（单位）
比活＝─────────────
每1mg供试品中蛋白量（mg）
【类别】 抗肿瘤药。
【贮藏】 遮光，密封，冷处保存。
【制剂】 注射用门冬酰胺酶
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