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中国药典2005版收载品种：重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）
名称:
重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）
汉语拼音:
Chongzu Yixing Ganyan Yimiao（CHO Xibao）
英文名:
Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques in CHO Cell
药物组成:
本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎（简称乙肝）病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加入氢氧化铝佐剂后制成。
用途:
用于预防乙型肝炎。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2制造
2.1生产用细胞
2.1.1细胞名称及来源
生产用细胞为 DNA重组技术获得的表达HBsAg的CHO细胞 C28株。
2.1.2细胞库的建立及传代
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
C28株主细胞库的传代应不超过第21代，工作细胞库应不超过第26代，生产疫苗的最终细胞代次应不超过第34代。
2.1.3主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.3.1细胞外源因子检查
细菌和真菌（附录Ⅻ A）、支原体（附录 B）、细胞病毒外源困于检查（附录Ⅻ C）均应为阴性。
2.1.3.2细胞鉴别试验
应用同工酶分析、生物化学方法、免疫学、细胞学和遗传标记物等任何方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。
2.1.3.3HBsAg表达量
主细胞库及工作细胞库细胞HBSAg表达量应不低于
原始细胞库的表达量。
2.1.4保存
细胞种子应保存于液氮中。
2.2原液
2.2.1细胞制备
经胰蛋白酶消化细胞，置适宜条件下培养。
2.2.2培养液
培养液为含有适量灭能小牛血清的DMEM液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。
2.2.3收获
培养适宜天数，当细胞表达HBsAg达到1.0ms/L以上时收获培养上清液。
2.2.4纯化
采用经批准的纯化方法进行纯化后，收获纯化的HBsAg。
2.2.5甲醛处理
纯化的HBsAg中按1:2000比例加入甲醛溶液，置37℃保温72小时。
2.2.6除菌过滤
HBSAg经超滤、浓缩、除菌过滤后即为原液（亦可在甲醛处理前进行除菌过滤）。
2.2.7原液检定
按3.1项进行。
2.3半成品
2.3.1配制
根据测定的蛋白质含量稀释原液，使HBSAg的最终含量为10μg/ml或20μg/ml。加入氢氧化铝佐剂吸附后，加入硫柳汞作为防腐剂，即为半成品。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3规格
每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，含HBsAg10μg或20μg。
2.4.4包装
符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1蛋白质含量
应为100-200μg/ml（附录Ⅵ B第二法）。
3.1.2特异蛋白带
依法检查（附录Ⅳ C），在分离腔中应有分子质量23kD、27kD蛋白带，可以有30kD蛋白带及HBsAg二聚体蛋白带。
3.1.3纯度
采用高效液相色谱法（附录Ⅲ B）测定，用SEC-HPLC法:亲水树脂体积排阻色谱柱，排阻分子质量低于1000kD，孔径100nm，粒度17μm，直径7.5mm，长30cm；流动相为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH6.8；用波长280nm检测。按面积归一化法计算乙型肝炎表面抗原纯度，应不低于95.0%。
3.1.4牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂。
3.1.5 CHO细胞DNA残留量
应不高于10pg/剂（附录Ⅸ B）。
3.1.6 CHO细胞蛋白残留量
采用酶联免疫法（双抗体夹心法）测定，应不高于总蛋白质含量的0.05%。
3.1.7无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.8支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
3.2半成品检定
3.2.1无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2.2细菌内毒素检查
应小于10 EU/剂（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
采用酶联免疫法检测，应为HBsAg。
3.3.2外观
应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
3.3.3化学检定
3.3.3.1 pH值
应为5.5-6.8（附录 Ⅴ A）。
3.3.3.2铝含量
应不高于0.43mg/ml（附录Ⅶ F）。
3.3.3.3硫柳汞含量
应不高于100μg/ml（附录Ⅶ B）。
3.3.3.4游离甲醛含量
应不高于50μg/ml（附录Ⅵ L）。
3.3.4效价测定
将疫苗连续稀释，每个稀释度接种4-5周龄末孕雌性NIH或BALB/c小鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，用参考疫苗作平行对照，4-6周后系血，用放射免疫法或酶联免疫法测定抗- HBs，计算ED50，供试品ED50/参考疫苗ED50之值应不低于1.0。
3.3.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.6异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
3.3.7细菌内毒素检查
应小于10EU/剂（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
4保存、运输及有效用
于2-8℃避光保存和运输。自效价测定合格之日起，有效期为2年。
5使用说明
重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）使用说明
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