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中国药典2005版收载品种：重组人粒细胞刺激因子注射液
名称:
重组人粒细胞刺激因子注射液
汉语拼音:
Chongzu Ren Lixibao Cijiyinzi Zhusheye
英文名:
Recombinant Human Granulocyte Colony-stimulating Factor Injection
药物组成:
本品系由含有高效表达人粒细胞集落刺激因子（GCSF）基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
中西药分类:
生物制品（治疗类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1工程菌菌种
2.1 名称及来源
重组人G-CSF 工程菌株系由带有人G-CSF基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
2.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.1.3菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.1.3.1划种LB琼脂平板
应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
2.1.3.2染色镜检
应为典型的革兰阴性杆菌。
2.1.3.3对抗生素的抗性
应与原始菌种相符。
2.1.3.4电镜检查（工作种子批可免做）
应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。
2.1.3.5生化反应
应符合大肠杆菌生物学性状。
2.1.3.6重组人G-CSF表达量
在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
2.1.3.7质料检查
该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
2.2原液
2.2.1种子液制备
将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
2.2.2发酵用培养基
采用适宜的不含任何抗生素的培养基。
2.2.3种子液接种及发酵培养
2.2.3.1在灭菌培养基中接种适量种子液。
2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录Ⅸ G）。
2.2.4发酵液处理
用适宜的方法收集处理菌体。
2.2.5初步纯化
采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。
2.2.6高度纯化
经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为重组人G-CSF原液，除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。
2.2.7原液检定
按3.1项进行。
2.3半成品
2.3.1配制与除菌
2.3.1.1稀释液配制
按经批准的配方配制稀释液。配制后应及时用于稀释。
2.3.1.2稀释与除菌
将检定合格的重组人G-CSF原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于2-8℃。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3规格
应为经批准的规格。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1生物学活性
依法测定（附录Ⅹ E）。
3.1.2蛋白质含量
依法测定（附录Ⅵ B第二法）。
3.1.3比活性
为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于6.0×107IU。
3.1.4纯度
3.1.4.1电泳法
依法测定（附录Ⅳ C）。用非还原型SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）或5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。
3.1.4.2高效液相色谱法
依法测定（附录Ⅲ B）。色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以A相（三氟乙酸-水溶液:取1.0ml三氟乙酸加水至1000ml，充分混匀）、B相（三氟乙酸-乙睛溶液:取1.0ml三氟乙酸加入色谱纯乙睛至1000ml，充分混匀）为流动相，在室温条件下，进行梯度洗脱（0-70%B相）。上样量不低于10μg，于波长280nm处检测，以G-CSF色谱峰计算理论板数应不低于1500。按面积归一化法计算，重组人G-CSF主峰面积应不低于总面积的95.0%。
3.1.5分子量
依法测定（附录Ⅳ C）。用还原型SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.Oμg，制品的分子质量应为18.8kD±1.88kD。
3.1.6外源性DNA残留量
每1次人用剂量应不高于10ng（附录Ⅸ B）。
3.1.7宿主菌蛋白残留量
应不高于总蛋白质的0.10%（附录Ⅸ C）。
3.1.8残余抗生素活性
依法测定（附录Ⅸ A）。不应含有残余氨等西林或其他抗生素活性。
3.1.9细菌内毒素检查
每300μg蛋白质应小于1OEU（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
3.1.10等电点
主区带应为5.8-6.6（附录Ⅳ D）。
3.1.11紫外光谱扫描
最大吸收峰波长应为 278nm±3nm（附录Ⅱ A）。
3.1.12肽图（至少每半年测定1次）
依法测定（附录Ⅷ E），应与对照品图形一致。
3.1.13 N-末端氨基酸序列（至少每年测定1次）
用氨基酸序列分析仪测定，其N-末端序列应为:
Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-Leu-Pro-Gln-Ser-Phe-Leu-Leu。
3.2半成品检定
3.2.1细菌内毒素检查
每300μg蛋白质应小于1OEU（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
3.2.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
按免疫印迹法（附录Ⅷ A）或免疫斑点法（附录Ⅷ B）测定，应为阳性。
3.3.2物理检查
3.3.2.1外观
应为澄明液体。
3.3.2.2可见异物
依法检查（附录Ⅴ B），应符合规定。
3.3.2.3装量
按附录Ⅰ A中装量项进行，应不低于标示量。
3.3.3 pH值
应为3.5-4.5（附录Ⅴ A）。
3.3.4生物学活性
应为标示量的80%-150%（附录Ⅹ E）。
3.3.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.6细菌内毒素检查
每1次人用剂量应小于10EU（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
3.3.7异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F小鼠试验法），应符合规定。
4保存、运输及有效用
于2-8℃避光处保存和运输。自分装之日起，按批准的有效期执行。
5使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定。
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