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中国药典2005版收载品种：吸附无细胞百白破联合疫苗
名称:
吸附无细胞百白破联合疫苗
汉语拼音:
Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe Yimiao
英文名:
Diphtheria，Tetanus and Acellular Pertussis CombinedVaccine，Adsorbed
药物组成:
本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝佐剂制成。
用途:
用于预防百日咳、白喉、破伤风。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1混合前单价原液
2.1.1无细胞百日咳疫苗原液制造应符合本品种附录的规定。
2.1.2白喉类毒素原液制造应符合“吸附白喉疫苗”中2.1-2.2项的规定。
2.1.3破伤风类毒素原液制造应符合“吸附破伤风疫苗”中2.1-2.2项的规定。
2.1.4原液检定
2.1.4.1百日咳疫苗原液检定
按本品种附录中2项进行。
2.1.4.2白喉类毒素原液检定
按“吸附白喉疫苗”中3.1项进行。
2.1.4.3破伤风类毒素原液检定
按“吸附破伤风疫苗”中3.1项进行。
2.2半成品
2.2.1配方
每1ml半成品中各种抗原成分含量如下:
无细胞百日咳疫苗原液 18μg PN
白喉类毒素 25Lf
破伤风类毒素 7Lf
2.2.2左剂配制
2.2.2.1配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法。用氨水配制者需透析除氨后使用，也可用其他适宜方法配制。
2.2.2.2配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体是液，不应含有凝块或异物。
2.2.2.3氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。
2.2.3合并及稀释
将白喉类毒素、破伤风类毒素及无细胞百日咳疫苗原液加入已稀释的佐剂内，调节pH值至5.8-7.2。
2.2.4半成品检定
按3.1项进行。
2.3成品
2.3.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.3.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.3.3规格
每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含元细胞百日咳疫苗效价应不低于4.0IU，白喉疫苗效价应不低于30IU，破伤风疫苗效价应不低于40IU。
2.3.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1半成品检定
无菌检查
依法检查（附录见Ⅻ A），应符合规定。
3.2成品检定
3.2.1鉴别试验
3.2.1.1无细胞百日咳疫苗
抽取本品按3.2.4.l进行，应产生相应抗体，或采用其他适宜的抗原抗体反应试验。
3.2.1.2白喉类毒素
可选择下列一种方法进行:（1）疫苗注射动物应产生抗体（附录用Ⅺ C）；（2）疫苗加构椽酸钠或碳酸钠将性剂溶解后，做絮状试验（附录对Ⅺ D），应出现絮状反应；
（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录规Ⅷ C），应出现免疫沉淀反应。
3.2.1.3破伤风类毒素
可选择下列一种方法进行:（1）疫苗注射动物后应产生破伤风抗体（附录对Ⅺ B）；（2）疫苗加入枸橼酸钠或碳酸钠将吸附剂溶解后做絮状试验（附录Ⅺ D），应出现絮状反应；（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录Ⅷ C），出现免疫沉淀反应。
3.2.2外现
振摇后应呈均匀乳白色混悬液，无摇不散的凝块或异物。
3.2.3化学检定
3.2.3.1 pH值
应为5.8-7.2（附录Ⅴ A）。
3.2.3.2氯化钠含量
应为7.5-95g/L（附录Ⅶ G）。
3.2.3.3氢氧化铝含量
应为1.0-1.5mg/ml（附Ⅶ F）。
3.2.3.4硫柳汞含量
应不高于0.1g/L（附录Ⅶ B）。
3.2.3.5游离甲醛含量
应不高于0.2g/L。（附录Ⅵ L）。
3.2.3.6戊二醇含量
应小于0.01g/L（附录Ⅵ l）
3.2.4效价测定
3.2.4.1无细胞百日咳疫苗
按“吸附百白破联合疫苗”中附录2进行。以适宜的稀释倍数稀释至第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释。免疫时间为21天。每1次人用剂量的免疫效价应不低于4.0IU；95%可信眼的低限应不低于又2.0IU。如达不到上述要求时可进行复试，但所有的有效试验结果必须以几何平均值（如用概率分析法时，应用加权几何平均）来计算。达到上述要求即判为合格。
3.2.4.2白喉疫苗
每1次人用剂量中白喉类毒素的免疫效价应不低于30IU（附录Ⅺ C）。
3.2.4.3破伤风疫苗
每1次人用剂量中破伤风类毒素的免疫效价应不低于40IU（附录对Ⅺ B）。
3.2.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2.6异性毒性检查
3.2.6.1无细胞百日咳疫苗
按本品种附录中2.5项进行。
3.2.6.2白喉、破伤风疫苗
用体重250-350g豚鼠，每批制品不少于4只。每只腹部皮下注射2.5ml，分两侧注射，每侧1.25ml，观察30天。注射部位可有浸润，经5-10天变成硬结，可能30天不完全吸收。在第10天、第20天、第30天称体重，到期体重比注射前增加，局部无化脓、无坏死、无破伤风症状及无晚期麻痹症者为合格。
3.2.7性逆转试验
每批供试品置370℃周，按本品种附录中2.6项进行。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自吸附之日起有效期为2年，自百日咳原液脱毒之日起总有效期不得超过3年。
5附录
无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
6使用说明
附录无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
本品系由百日咳杆菌的培养物或其上清液，经硫酸铵盐析和密度梯度离心法提取百日咳毒素（PT）和丝状血凝素（FHA）等有效组分，经脱毒制成。用于制备吸附无细胞百白破联合疫苗。
1制造
1.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
1.1.l菌种的名称
生产用菌种应采用百日咳Ⅰ相CS菌株或其他适宜菌株。
1.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
1.1.3种子批菌种的检定
1.1.3.l培养特性
于包一姜（Bordet-Gengou）培养基或其他适宜培养基上培养，各菌株应具有典型的形态及生化特性。
1.1.3.2血清学试验
取经35-37℃培养40-48-48小时的菌苔，混悬于生理氯化钠溶液或PBS内，制成适宜浓度的菌是液，与Ⅰ相参考血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价之半。同时与单价分型血清做定性凝集反应，其型别应与该菌种标定型别相同。
1.1.3.3皮肤坏死试验
取经 35-37℃培养40-48小时的菌苔，混悬于PBS内，并稀释成不同浓度的菌液；取家兔或豚鼠至少2只，分别用每一稀释度的菌液皮内注射0.1ml，经72小时观察注射部位的皮肤反应，如其中1只家兔或豚鼠在注射含菌40×107以下稀释度的部位出现出血性坏死者，为阳性反应，判为合格。
1.1.3.4毒力试验
用体重16-18g的小鼠至少3组，每组至少10只，在麻醉状态下从鼻腔滴入经培养20-24小时、以PBS稀释的菌液队0.5ml，观察14天，记录小鼠生死情况，按Reed-Muench法计算LD50，ILD50的菌数应不高于1.2×108。
1.1.3.5效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的稀释倍数为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
1.2原液
1.2.1生产用种子
将工作种子批菌种启开后，接种于改良包一姜培养基或其他适宜培养基上，于35-37℃培养不超过72小时，第2代不超过48小时，然后接种于S-S（Stainer-Scholte）培养基或其他适宜培养基上，于35-37℃培养不超过48小时用于生产。传代菌种保存不得超过14天，工作种子批启开后用于生产时不应超过10代。
1.2.2生产用培养基
应选用经批准的培养基。
1.2.3培养
可采用静置培养法或发酵罐培养法，培养过程应取样做纯菌检查。
1.2.4收获和杀菌
培养物于对数生长期后期或静止期前期收获。在培养物中加入硫柳汞杀菌。
1.2.5纯化
采用硫酸被盐析和蔗糖密度梯度离心去除内毒素，收集PT、FHA有效组分。
1.2.6蛋白氮含量测定
依法测定（附录Ⅵ B第二法）。
L.2.7进制纯度测定
采用聚丙烯酸胺凝胶电泳或SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳检测，应显示主要含有PT和FHA两种组分，且批间比例应保持一致。PT和FHA等有效组分应不低于总蛋白含量的85%。
1.2.8脱毒和匀化
采用甲醛溶液或戊二醛溶液脱毒，然后用适宜方法除去脱毒剂，再经超声波匀化处理即为原液。
2检定
2.1染色镜检
取供试品的沉淀物，涂片染色镜检，不应有百日咳杆菌和其他细菌。
2.2效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的稀释倍数为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
2.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.4不耐热毒素试验
用生理氯化钠溶液将供试品稀释至半成品浓度的2倍，用48-72小时龄的乳鼠至少4只，每只皮内注射0.025ml，或用体重2.5kg的家兔至少2只，每只皮内注射队1ml，观察4日，受试动物不得出现不耐热毒素引起的任何局部反应。
2.5特异性毒性检查
用生理氯化钠溶液将毒性参考品做3信系列稀释，将供试品稀释至与成品相同浓度。用体重14-16g NIH小鼠（雌性或雌雄各半），至少10只为一组，供试品和毒性参考品的每一稀释度各用一组，每只小鼠腹腔注射队0.5ml，分别进行2.5.l-2.5.3项试验。
2.5.l小鼠体重减轻试验
于注射前和注射后16小时分别称取小鼠体重，试验结果经统计学方法处理后，注射供试品的小鼠体重减轻毒性的活性应不高于10 BWDU/ml。
2.5.2小鼠白细胞增多试验
于注射后3日分别取小鼠末梢血进行白细胞计数。试验结果经统计学方法处理后，注射供试品的小鼠白细胞增多毒性的活性应不高于0.5LPU/ml。
2.5.3小鼠组胺致敏试验
于注射后4日，每只小鼠腹腔注射0.5ml溶液（含二盐酸组胶4mg或二磷酸组胺2mg），30分钟后分别测小鼠肛温。试验结果经统计学方法处理后，供试品的小鼠组胺致敏毒性的活性应不高于0.8HSU/ml。
2.6毒性逆转试验
每批供试品置37℃4周，然后按2.5.3项进行试验。
2.7热原检查
用生理氯化钠溶液将供试品稀释成半成品浓度的1/50，依法检查（附录Ⅻ D），应符合规定。注射剂量按家兔体重每1kg注射1ml。
3保存、运输及有效用
于2-8℃避光保存和运输。原液自脱毒之日起总有效期为3年。
吸附无细胞百日破联合疫苗使用说明
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