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中国药典2005版收载品种：双价肾综合征出血热灭活疫苗
名称:
双价肾综合征出血热灭活疫苗
汉语拼音:
Shuangjia Shenzonghezheng Chuxuere Miehuoyimiao
英文名:
Haemorrhagic Fever With RenalSyndrome Bivat Vaccine，Inactirated
药物组成:
本品系用Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热（简称出血热）病毒分别接种原代沙鼠肾细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒，加入氢氧化铝佐剂后制成。
用途:
用于预防Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1生产用细胞
生产用细胞为原代沙鼠肾细胞。
2.1.1细胞管理及检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.2细胞制备
选用10-20日龄沙鼠，无菌取肾，剪碎，经胰蛋白酶消化分散细胞，接种培养瓶，用MEM等适宜的培养基培养。
2.2毒种
2.2.1名称及来源
生产用毒株为I型出血热病毒Z1O株和Ⅱ型出血热病毒Z37株。
2.2.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
病毒接种鼠脑制备原始及生种子批，主种于批毒种接种原代沙鼠肾细胞制备工作种子批。Ⅰ型病毒Z10株原始种子批传代应不超过第12代，主种子批应不超过第13代，工作种子批应不超过第18代；Ⅱ型病毒Z37株原始种子批应不超过第10代，主种子批应不超过第11代，工作种子批应不超过第16代。
2.2.3种子批毒种的检定
生种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.1-2.3.4项检定。
2.2.3.1鉴别试验
各型毒种分别与已知的相应型别的出血热病毒免疫血清等量混合，置37℃水浴90分钟，接种Vero-Eo-单层细胞，观察10-14天，以免疫荧光法测定，中和指数应大于1000。
2.2.3.2病毒滴定
取毒种10倍系列稀释，接种Vero-E6细胞进行病毒滴定，滴度应不低于6.0lg CCID50/ml（荧光法），或接种2-3日龄乳鼠或25-30日龄沙鼠，进行脑内毒力滴定，滴度应不低于7.0 lg LD50/ml。
2.2.3.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.2.3.4支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
2.2.3.5病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.2.3.6免疫原性检查
取主种子批毒种制备双价原疫苗，接种2kg左右的白色家兔4只，每只后腿肌内注射1.0ml，7天后以同法再免疫1次。第一次免疫后4周采血分离血清，用蚀斑减少中和试验测中和抗体，试验用病毒为76－118株或UR株；同时用参考血清作对照，每只家兔的Ⅰ型和Ⅱ型中和抗体滴度均应不低于1:10。
2.2.4毒种保存
毒种应于-60℃以下保存；液体工作种子批毒种于-60℃以下保存不得超过1年。
2.3单价原液
2.3.1细胞制备
同2.1.2项。
2.3.2培养液
培养液为加入适量灭能小牛血清的MEM或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。
2.3.3对照细胞病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.3.4病毒接种和培养
当细胞培养成致密单层后，分别接种出血热病毒Ⅰ型乙。株或Z37型Z37株毒种，在适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用PBS冲洗去除小牛血清，加入适量维持液继续培养3-5天。
2.3.5病毒收获
收获前用荧光抗体法检查细胞的病毒感染率，应在95%以上。收获培养液，即为单价病毒收获液。
2.3.6单价病毒收获液检定
按3.1项进行。
2.3.7病毒灭活
病毒收获液中按1:400O的比例加入β-丙内酯和终浓度不高于0.10mg/ml的硫柳汞，置2-8℃7天或2-8℃过夜再放置37℃2小时，以灭活病毒和水解β-丙内酯。
2.3.8合并
合并检定合格的灭活的病毒收获液，经离心、过滤并加入适量的人血白蛋白作为保护剂，即为单价原液。
2.3.9单价原液检定
按3.2项进行。
2.4半成品
2.4.1配制
等量混合经检定合格的I型和Ⅱ型出血热病毒原液，加入终浓度不高于0.70mg/ml的氢氧化铝佐剂吸附，即为半成品。
2.4.2半成品检定
按3.3项进行。
2.5成品
2.5.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3规格
每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml。
2.5.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1单价病毒收获液检定
3.1.1病毒滴定
将病毒收获液10倍系列稀释，取至少3个稀释度，分别接种Vero-E6细胞或沙鼠肾单层细胞，置适宜温度下培养7天左右，以免疫荧光染色法测定病毒滴度，应不低于6.0lg CCID50/ml。
3.1.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.3支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
3.2单价原液检定
3.2.1病毒灭活验证试验
按灭活后病毒收获液总量的0.1%取样，透析后接种Vero--E6细胞，连续传3代，每10-14天传1代，每代以免疫荧光法检查病毒，结果均应为阴性。
3.2.2抗原量测定
可采用反向间接血凝试验进行抗原量测定，应不低于1:64。
3.2.3牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂。
3.2.4无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3半成品检定
无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.4成品检定
3.4.1鉴别试验
按2.2.3.6项进行，应符合规定。当效价测定不合格时，鉴别试验不成立。
3.4.2外观
应为橘红色微浑浊液体，久置形成可摇散的沉淀，无异物。
3.4.3化学检定
3.4.3.1 pH值
应为7.0-8.0（附录Ⅴ A）。
3.4.3.2硫柳汞含量
应不高于0.10mg/1（附录Ⅶ B）。
3.4.3.3氢氧化铝含量
应不高于0.70mg/ml（附录Ⅶ F）。
3.4.4效价测定
按动2.2.3.6项进行。免疫4只家兔，每只家兔对Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒的中和抗体滴度均不应低于1:10。
3.4.5热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验。于37℃放置7天，按2.2.3.6项进行效价测定。如合格，视为效价测定合格。
3.4.6无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.4.7细菌内毒素检查
应不高于100EU/剂（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
3.4.8异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自效价测定合格之日起，有效期为1年6个月 。
5使用说明双价肾综合征出血热灭活疫苗使用说明
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