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中国药典2005版收载品种：人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）
名称:
人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）
汉语拼音:
Renyang Kuangquanbing Yimiao（Dishushen xbiao）
英文名:
Rabies Vaccine（Hamster Kidney Cell）for Human Use
药物组成:
本品系用狂犬病病毒固定毒接种原代地鼠肾细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩、纯化后，加入适宜的稳定剂，可加入氢氧化铝佐剂制成。
用途:
用于预防狂犬病。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2制造
2.1生产用细胞
生产用细胞为原代地鼠肾细胞或连续传代不超过5代的地鼠肾细胞。
2.1.1细胞管理及检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.2细胞制备
选用12-14日龄地鼠，无菌取肾，剪碎，经胰蛋白酶消化、分散细胞，接种培养瓶，用适宜的培养液进行培养。以同一容器内制备的细胞为一个消化批。
2.2毒种
2.2.1名称
生产用毒种为狂犬病病毒固定毒aG株或其他经地鼠肾细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。
2.2.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
原始种子批为2aG1，主种子批应不超过4aG。在地鼠肾原代细胞和豚鼠脑内交替传代制备工作种子批，在地鼠肾原代细胞的传代应不超过第6代，即不超过10aG；在豚鼠脑内传代应不超过第5代，即10aG5。
2.2.3种子批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定。
2.2.3.1鉴别试验
以小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性，中和指数应不低于500。
2.2.3.2病毒滴定
取毒种做10情系列稀释，每个稀释度脑内接种体重为11-13g小鼠至少6只，病毒滴度应不低于8.0lg LD50/ml。
2.2.3.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.2.3.4支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
2.2.3.5病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.2.3.6免疫原性检查
用主种子批毒种制备原疫苗，腹腔注射体重为12-14g小鼠，每只0.5ml。7天后重复接种二次。第1次免疫后的第14天，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击，每只0.03ml，每个稀释度10只小鼠。同时，取同样体重未免疫小鼠，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击作对照，每个稀释度10只小鼠，每只0.03ml。保护指数应不低于100。
2.2.4毒种保存
冻干毒种应置-2℃以下保存，液体工作种子批毒种于-60℃以下保存应不超过2年。
2.3原液
2.3.1细胞制备
同2.1.2项。
2.3.2培养液
培养液为含适量灭能小牛血清和乳蛋白水解物的MEM、199或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。
2.3.3对照细胞病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.3.4病毒接种和培养
当细胞培养成致密单层后，接种狂犬病病毒，置适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用PBS冲洗去除小牛血清，加入适量维持液，置33-35℃继续培养适当时间。
2.3.5病毒收获
经培养适宜时间收获病毒液，即为病毒单次收获液，根据细胞生长情况，可多次收获。
2.3.6单次病毒收获液检定
按3.1项进行。
2.3.7病毒灭活
病毒收获液中按1:4000的比例加入甲醛溶液，置适宜温度下一定时间内灭活病毒。
2.3.8浓缩、纯化
2.3.8.1合并及超滤、浓缩
同批细胞生产的多次病毒收获液可在严格无菌操作下合并为一批，经超滤适当浓缩。
2.3.8.2纯化
经浓缩并检定合格后的病毒液以柱色谱或其他适宜的方法纯化。纯化后加入适量人血白蛋白作为稳定剂及一定量硫柳汞作为防腐剂，即为原液。
2.2.3.9原液检定
按3.2项进行。
2.4半成品
2.4.1配制
根据蛋白质含量和抗原含量进行配制，总蛋白质含量应不高于120μg/剂。可加入终浓度不高于0.70mg/ml的氢氧化铝佐剂吸附，即为半成品。
2.4.2半成品检定
按3.3项进行。
2.5成品
2.5.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3规格
每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2.5IU。
2.5.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1单次病毒收获液检定
3.1.1病毒滴定
按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于5.5lg LD50/ml。
3.1.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.3支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
3.2原液检定
3.2.1抗原含量
采用适宜的方法测定抗原含量。
3.2.2病毒灭活验证试验
将病毒灭活后的原液，脑内接种体重为11-13g小鼠20只，每只0.03ml，观察14天，应全部健存（3天内死亡的不计）。
3.2.3蛋白质含量
取纯化后未加稳定剂的原液，依法测定，应不高于120μg/剂（附录Ⅵ B第二法）。
3.2.4牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂。
3.2.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3半成品检定
无菌检查
依法检查（附录批Ⅻ A），应符合规定。
3.4成品检定
3.4.1鉴别试验
按3.4.4项进行，应符合规定。效价测定不合格时，鉴别试验不成立。
3.4.2外观
含佐剂疫苗应为乳白色浑浊液体，久置形成可摇散的沉淀，无异物；无性剂疫苗应为无色澄明液体。
3.4.3化学检定
3.4.3.1 pH值
应为7.2-8.0（附录Ⅴ A）。
3.4.3.2硫柳汞含量
应不高于0.10mp/ml（附录Ⅶ B）。
3.4.3.3氢氧化铝含量
含佐剂疫苗应进行此项检测，氢氧化铝含量应不高于0.70mg/ml（附录Ⅶ v）。
3.4.3.4游离甲醛含量
应不高于0.10mg/ml（附录Ⅵ L）。
3.4.4效价测定
应不低于2.5IU/剂（附录Ⅺ A）。
3.4.5热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验。于37℃放置14天后，按3.4.4项进行效价测定。如合格，视为效价测定合格。
3.4.6无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.4.7异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
3.4.8细菌内毒素检查
应不高于100EU/剂（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。目效价测定合格之日起，有效期为1年。
5使用说明人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）使用说明
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