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中国药典2005版收载品种：皮上划痕用鼠疫活疫苗
名称:
皮上划痕用鼠疫活疫苗
汉语拼音:
Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
英文名:
Plague Vaccine（Live）for Percutaneous Scarification
药物组成:
本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。
用途:
用于预防鼠疫。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1菌种名称及来源
采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。
2.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3种子批的传代
工作种子批菌种启开后，第2-3代菌种用于生产，不得用第4代菌种生产。
2.1.4种子批菌种的检定
2.1.4.1培养特性及染色镜检
在琼脂平皿上，35-37℃培养44-48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉场透明。涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。
2.1.4.2生化特性
发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（附录ⅩⅣ）。
2.1.4.3噬菌体裂解试验
将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入稀释度为10-6以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44-48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。
2.1.4.4特异性毒性试验
选用体重300-400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×1010（于28-30℃培养44-48小时）的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。
2.1.4.5免疫力试验
选用体重200-250g的豚鼠10只，每只皮下注射含菌人7.0×109(于28-30℃培养44-48小时)的培养物，于20-25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。
2.1.5种子批保存
菌种应冻干，于2-8℃避光保存。
2.2原液
2.2.1生产用种子
2.2.1.1第1代菌种
将工作种子批菌种启开后，接种子厚金格尔琼脂培养基上，于28-30℃培养44-48小时为第1代，置2-8℃保存可使用15天。
2.2.1.2第2代菌种
用生理氯化钠溶液将第1代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28-30℃培养44-48小时为第2代。由此制备适宜数量的生产用种子供生产用。
2.2.1.3第3代菌种
在第2代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第2代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于 28-30℃培养44-48小时为第3代。由此制备适宜数量的生产用种子供生产用。
2.2.2生产用培养基
可采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.8-7.2）或经批准的其他培养基。
2.2.3菌种接种和培养
第2-3代菌种经肉眼检查无杂菌后，加入适量生理氯化钠溶液洗下菌答，制成均匀的菌是液，用此菌悬液接种培养瓶，于28-3O℃培养44-48小时后，逐瓶肉眼检查，有杂菌者废弃。
2.2.4采集合并
用由蔗糖、明胶、硫脲、味精及尿素组成的稳定剂洗
下菌苔（洗菌前将凝固水倒去）或将菌苔刮入上述稳定剂内，进行纯菌试验，合格后方可合并制成原液。
2.2.5原液检定
按3.1 项进行。
2.3半成品
2.3.1配制
根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1次人用剂量含菌7.0×1O8-9.0×108。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。
2.4.3规格
每瓶10次人用剂量含菌8.0×109、20次人用剂量含菌l.6×1010。每1次人用剂量含活菌数应大于3.6×108。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1纯菌检查
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
3.1.2浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定。
3.2半成品检定
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片境检，应符合鼠疫杆菌EV株特征，不得有杂菌。
3.3成品检定
除水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。
3.3.1鉴别试验
按2.1.4.3 项进行。
3.3.2外观
应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入生理氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。
3.3.3水分
应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。
3.3.4纯菌检查
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
3.3.5菌落和菌形检查
应是典型粗糙型菌落，涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。
3.3.6浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定浓度。每1次人用剂量
含菌数为7.0×108-9.0×108。
3.3.7活菌数测定
取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×103/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置28-30℃培养2-3天。每1次人用剂量活菌数应大于3.6×108。
3.3.8效力测定
取每5批疫苗中的首批进行效力测定。用体重250-300g豚鼠10只，每只皮下注射含菌5.0×107，注射后20-25天以200MLD的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有3组豚鼠作对照，每组3只，分别于各组豚鼠皮下注射0.5MLD、1MLD和2MLD。各组动物于注射后，观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照组动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，效力测定为合格。
3.3.9特异性毒性检查
取体重250-35Og豚鼠2只，每只皮下注射含菌1.2×10的本品，第6天称体重，体重减轻应不超过20%，并取其中1只解剖，另1只观察到21天解剖。检查项目及要求同2.1.44项。
3.3.10稀释剂
稀释剂为氯化钠注射液。
4保存、运输及有效期
于 2-8℃避光保存和运输，自成品活菌数测定合格之日起有效期为1年。
5使用说明
皮上划痕用鼠疫活疫苗使用说明
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