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中国药典2005版收载品种：皮上划痕人用布氏菌活疫苗
名称:
皮上划痕人用布氏菌活疫苗
汉语拼音:
Pishang Huahen Renyong Bushijun Huoyimiao
英文名:
Brucellosis Vaccine（Live）for Percutaneous Scarification
药物组成:
本品系用布氏菌的弱毒菌株经培养、收集菌体加入稳定剂后冻干制成。
用途:
用于预防布氏菌病。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1名称及来源
生产用菌种为牛布氏菌的弱毒菌株104M株。
2.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
禁止使用通过动物传代后再分离之菌株制造疫苗。
2.1.3种子批菌种的检定
2.1.3.1培养特性
在含有1:50 00O碱性品红培养基应生长，但在含同浓度的硫苗培养基应不生长（亦可用纸片法检查），在肝琼脂斜面培养基产生微量硫化氢。涂片镜检应为革兰明性球杆菌。
2.1.3.2变异检查
用生理氯化钠溶液将新鲜培养物制成含菌2.5×109-3.O×109/ml的菌悬液，置90℃水浴中30分钟，不应出现凝集现象。用同浓度的菌悬液与1:1000三胜黄素水溶液等量混合，于 37℃放置24小时，不应出现凝集现象。用结晶紫菌落染色检查，菌落变异率不高于3%。
2.1.3.3噬菌体裂解试验
将菌种接种于肝琼脂平皿，加入布氏菌Tb噬菌体1滴，于35-37℃培养44-48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。
2.1.3.4血清学试验
用生理氯化钠溶液将新鲜培养物制成含菌5.0×109/ml的菌是液，与布氏菌参考血清做凝集反应，其凝集效价应达到血清原效价。
2.1.3.5残余毒力检查
用生理氯化钠溶液将35-37℃培养44-48小时之肝琼脂斜面新鲜培养物制成菌悬液，并稀释成含菌1.5×109/ml、3.0×109/ml、6.0×109/ml、1.2×1010/ml和2.4×1010 /ml等5个浓度的菌是液。取体重18-2g9小鼠25只分为5组，各组分别用不同浓度的菌悬液腹腔注射，每只0.5ml，观察7天，计算LD50应含菌1.0×109-2.0×109。
2.1.3.6免疫力试验
每3-5年至少做一次免疫力试验。用生理氯化钠溶液将菌种第1代新鲜培养物制成 2.0×108 /ml的菌悬液。取体重300-350g豚鼠10只，每只皮下注射1ml，经25-30天后，每只豚鼠皮下攻击羊型强毒布氏菌10个或20个感染量（MID）。同时取3只豚鼠作对照，皮下注射1MID。免疫及对照豚鼠于注射毒菌悬液后均观察25-30天后解剖，取出鼠腹股沟淋巴结、腹主动脉旁淋巴结、肝及脾，分别接种肝琼脂中管斜面培养基，于35-37℃培养10天。如免疫动物组织之培养物有布氏菌生长，应用硫童培养基（亦可用纸片法）和硫化氢反应做菌型鉴别试验。对照组3只豚鼠都必须发生全身感染，即肝脏或脾脏应分离出羊型毒菌。免疫组攻击10MID时，10只豚鼠中不应有2只以上分离出羊型毒菌；攻击20MID时，10只豚鼠中不应有3只以上分离出羊型毒菌。
2.1.4 种子批的保存
菌种应冻干，于2-8℃保存。
2.2原液
2.2.1生产用种子
2.2.1.1将工作种子批菌种启开后，接种在肝琼脂斜面或其他适宜培养基上，置35-37℃培养44-48小时为第1代。第1代菌种须进行工:1:500 三胜黄素玻片凝集试验，只有光滑型菌方可用于疫苗生产。第1代菌种斜面于2-8℃可保存15日。
2.2.1.2将第1代菌种接种到肝琼脂或其他适宜培
养基上，置35-37℃培养44-48小时为第2代菌种，经肉眼纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌是液。即为生产用种子。
2.2.2培养基
可采用pH6.6-7.2的琼脂或经批准的其他培养基。
2.2.3菌种接种和培养
将第2代菌种接种2.2.2项培养基上，置35-37℃培养44-48小时.肉眼逐瓶检查，有杂菌者应废弃。
2.2.4采集
用含有蔗糖、明胶、硫脲和味精的稳定剂或其他适宜的稳定剂洗下菌苔或刮取菌苔于稳定剂内。数瓶培养物可采入或刮入1瓶（或1大管）稳定液内，即为原液，置2-8℃保存。检定合格的原液可进行合并。
2.2.5原液检定
按3.1项进行。
2.3半成品
2.3.1配制
将合并后的原液稀释成含菌1.8×1011-2.0×1011/ml，使每1次人用剂量含菌9.0×109-10.0×10。稀释后的原液经纯菌检查合格后即可分装冻干。由原液采集到冻干不得超过7天。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即进行冻干，真空封口，亦可充氮封口。
2.4.3规格
每瓶10次人用剂量。每1次人用剂量含菌数为9.O×109-10.0×109。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
纯菌检查
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.2半成品检定
纳菌检查
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.3成品检定
除水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液，复溶后进行其余各项检定。
3.3.鉴别试验
用特异血清做凝集试验，应出现明显凝集反应，或按2.1.3.3项进行。
3.3.2外观
应为乳白色疏松体。按标示量加入生理氯化钠溶液后应于1分钟内复溶，并呈均匀悬液。
3.3.3水分
应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。
3.3.4纯菌检查
按附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.3.5菌型检查
每亚批疫苗应用硫董培养基（或纸片法）及硫化氢反应做菌型鉴别检查，应呈牛布氏菌的培养特性。
3.3.6浓度测定
按“中国细菌法度标准”测定浓度，每1次人用剂量应含菌数9.0×109-1.0×1010。
3.3.7活菌数测定及菌落变异检查
每亚批取3瓶，加生理氯化钠溶液复溶混匀后比浊。将菌液浓度稀释为含菌1.0×103/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。用涂菌棒涂匀后置35-37℃培养4-5天，计算活菌数，每1次人用剂量含活菌数应大于5×109；同时用结晶紫菌落染色检查，菌落变异率不得超过10%。
3.3.8效力测定
取每5批疫苗中的首批进行效力测定。将复溶后的本品用灭菌生理氯化钠溶液稀释成含菌5.0×108/ml菌悬液。取体重300-350g豚鼠10只，每只皮下注射1ml。经25-30天后，每只豚鼠皮下攻击羊型强毒布氏菌10MID或20MID。同时用3只豚鼠作对照，于皮下注射1MID。各组动物于注射毒菌是液后25-30天解剖，取鼠腹股沟淋巴结、腹主动脉旁淋巴结、肝及脾，分别接种肝琼脂中管斜面培养基，于37℃培养10天。如免疫动物组织之培养物有布氏菌生长，需用硫堇培养基（亦可用纸片法）和硫化氢反应做菌型鉴别试验。对照组3只豚鼠都必须发生全身感染，即肝脏或脾脏应分离出羊型毒菌。攻击1OMID时，10只免疫豚鼠中不应有3只以上分离出羊型毒菌；攻击20MID时，10只免疫豚鼠中不应有4只以上分离出羊型毒菌。
3.3.9特异性毒性试验
每亚批取3瓶，用体重18-20g/小鼠5只，每只皮下注射含菌1.0×109/ml的菌是液0.5ml。观察7天不应有死亡，如有死亡应复试一次，仍有死亡，为不合格。
3.3.10稀释剂
稀释剂为氯化钠注射液。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自活菌数测定合格之日起有效期为1年。
5使用说明
皮上划痕人用布氏菌活疫苗使用说明
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