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中国药典2005版收载品种：皮内注射用卡介苗
名称:
皮内注射用卡介苗
汉语拼音:
Pinei Zhusheyong Kajiemiao
英文名:
BCG Vaccineforlntradermal Injection
药物组成:
本品系用卡介菌经培养后，收集菌体，加入稳定剂冻干制成。
用途:
用于预防结核病。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
卡介苗生产车间必须与其他生物制品生产车间及实验室分开。所需设备及器具均须单独设置并专用。卡介苗制造、包装及保存过程均须避光。
从事卡介苗制造的工作人员及经常进入卡介苗制造室的人员，必须身体健康，经X射线检查无结核病，且每年经X射线检查1-2次，可疑者应暂离卡介苗的制造。
2制造
2.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
2.1.1名称及来源
生产用菌种为卡介菌D2 PB302菌株。严禁使用通过动物传代的菌种制造卡介苗。
2.1.2种于批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
2.l.3种子批的传代
工作种子批至单批收获培养物的总传代数不得超过12代。
2.1.4种子批菌种的检定
2.1.4.1培养特性
卡介菌在苏通培养基上生长良好，培养温度在37-39℃之间。抗酸染色应为阳性。在苏通马铃薯培养基上培养的卡介菌应是干皱成团略呈浅黄色。在牛胆汁马铃薯培养基上为浅灰色黏膏状菌苔。在鸡蛋培养基上有突起的皱型和扩散型两类菌落，且带浅黄色。在苏通培养基上卡介菌应浮于表面，为多皱、微带黄色的菌膜。
2.1.4.2毒力试验
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300-400g的同性豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液（5mg/ml），每周称体重，观察5周动物体重不应减轻；同时解剖检查，大网膜上可出现脓疱，肠系膜淋巴结及脾可能肿大，肝及其他脏器应无肉眼可见的病变。
2.1.4.3无有毒分枝杆菌试验
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300-400g的同性豚鼠6只，于股内侧皮下各注射1ml菌液（10mg/ml），注射前称体重，注射后每周观察1次注射部位及局部淋巴结的变化，每2周称体重1次，豚鼠体重不应降低。6周时解剖3只豚鼠，满3个月时解剖另3只，检查各脏器应允肉眼可见的结核病变。若有可疑病灶时，应做涂片和组织切片检查，并将部分病灶磨碎，加少量生理氯化钠溶液混匀后，由皮下注射2只豚鼠，若证实系结核病变，该菌种即应废弃。当试验未满3个月时，豚鼠死亡则应解剖检查，若有可疑病灶，即按上述方法进行，若证实系结核病变，该菌种即应废弃。若证实属非特异性死亡，且豚鼠死亡1只以上时应复试。
2.1.4.4免疫力试验
用种子批菌种制备疫苗，经皮下免疫体重300-400g豚鼠4只，每只注射0.2ml（1/10人用剂量），对照组注射0.2ml生理氯化钠溶液。豚鼠免疫后4-5周，经皮下攻击103-104强毒人型结核分枝杆菌，攻击后5-6周解剖动物，免疫组与对照组动物的病变指数及脾脏毒菌分离数的对数值经统计学处理，应有显著差异。
2.1.5种子批保存
冻干菌种于2-8℃保存。
2.2原液
2.2.1培养基
生产用培养基为苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培养基或液体苏通培养基。
2.2.2生产用种子
启开工作种子批菌种，在苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培养基或液体苏通培养基上每传1次为1代。在马铃薯培养基培养的菌种置冰箱保存，不得超过2个月。
2.2.3菌种接种与培养
挑取生长良好的菌膜，移种于改良苏通综合培养基或经批准的其他培养基的表面，置37℃静止培养。
2.2.4原液收集和合并
培养结束后，应逐瓶检查，若有污染、湿膜、浑浊等情况应废弃。收集菌膜压干，移入盛有不锈钢珠瓶内，钢珠与菌体的比例应根据研磨机转速控制在一适宜的范围，并尽可能在低温下研磨。加入适量无致敏原稳定剂稀释，制成原液。
2.2.5原液检定
按3.1项进行。
2.3半成品
2.3.1配制
用稳定剂将原液稀释成1.0mg/ml或0.5mg/ml，即为半成品。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装过程中务使疫苗混合均匀。疫苗分装后应立即冻干，冻干后应立即封口。
2.4.3规格
每瓶10次人用剂量含卡介菌0.5mg、5次人用剂量含卡介菌0.25g。每1mg卡介菌含菌数应不低于1.0×106CFU。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1纯菌检查
按附录Ⅻ A的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.1.2浓度测定
用国家药品检定机构分发的冻干卡介苗参考比浊标准，以分光光度法或其他方法测定原液浓度。
3.2半成品检定
3.2.1纯菌检查
按附录Ⅻ A的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.2.2浓度测定
按3.1.2项进行。
3.2.3活菌数测定
应不低于 1.O×106CFU/ml。
3.3成品检定
除水分测定外，按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。
3.3.1鉴别试验
应做抗酸染色涂片检查，细菌形态与特性应符合卡介菌特征。
3.3.2外观
应为白色疏松体或粉末状，按标示量加入注射用水，应在3分钟内复溶呈均匀悬液。
3.3.3水分
应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。
3.3.4纯菌检查
按附录Ⅻ A的方法进行，生长物做涂片镜检，不得有杂菌。
3.3.5效力测定
用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300-400g的同性豚鼠4只，每只皮下注射0.5mg供试品，注射5周后皮内注射TB-PPD PD 10IU/0.2ml，并于24小时后观察结果，局部硬结反应直径应不小于5mm。
3.3.6活菌数测定
每亚批疫苗均应做活菌数测定。抽取5支疫苗稀释并混合后进行测定，培养4周后含活菌数应不低于1.0×106CFU/mg。本试验可与热稳定性试验同时进行。
3.3.7无有毒分枝杆菌试验
选用结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（皮内注射0.2ml，含10IU）阴性、体重300-400g的同性豚鼠6只，每只皮下注射相当于50次人用剂量的供试品，每2周称体重一次，观察6周，动物体重不应减轻；同时解剖检查每只动物，若肝、脾、肺等脏器无结核病变，即为合格。若动物死亡或有可疑病灶时，应按2.1.4.3项进行。
3.3.8热稳定性试验
取每亚批疫苗于37℃放置28天测定活菌数，并与4℃保存的同批疫苗进行比较，计算活菌率；放置37℃的本品活菌数应不低于置4℃本品的25%，且不低于2.0×105CFU/mg。每一机柜冻干疫苗应抽样进行此项试验。
3.3.9稀释剂
稀释剂为灭菌注射用水。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自分装之日起，按批准的有效期执行。
5使用说明
皮内注射用卡介苗使用说明
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