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中国药典2005版收载品种：流感全病毒灭活疫苗
名称:
流感全病毒灭活疫苗
汉语拼音:
Liugan Quanbingdu Miehuoyimiao
英文名:
Influenza Vaccine（Whole Virion），Inactivateted
药物组成:
本品系用WHO推荐的并经国家食品药品监督管理局批准的甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒株分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩和纯化后制成。
用途:
用于预防流行性感冒。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2制造
2.1生产用鸡胚
毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群；疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用9-11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。
2.2毒种
2.2.1名称和来源
生产用毒种为WHO推荐并经批准的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为当前流行的病毒株或相似株。
2.2.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批传代应不超过批准的代次。
2.2.3种于批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定。
2.2.3.1鉴别试验
血凝素型别鉴定:应用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。
2.2.3.2病毒血凝满度
采用血凝法检测，血凝效价应不低于1 :120。
2.2.3.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.2.3.4支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
2.2.3.5外源性禽白血病病毒检测
用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和毒种后，接种SPF鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。
2.2.3.6外源性禽腺病毒检测
用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和毒种后，接种SPF鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的1型和Ⅲ型禽腺病毒，结果均应阴性。
2.2.4毒种保存
冻干毒种应置-20℃以下保存，液体毒种应于-60℃以下保存。
2.3单价原液
2.3.1病毒接种和培养.
于鸡胚尿囊胜接种经适当稀释的工作种子批毒种后，置33-35℃培养48-72小时。一次未使用完的工作种子批毒种，不得再回冻继续使用。
2.3.2病毒收获
筛选活鸡胚，置2-8℃一定时间冷胚后，分组收获尿囊液，即为单次收获物。
2.3.3合并
单型毒种的单次收获物可合并为单价病毒合并液。
2.3.4病毒灭活
加入适宜浓度的甲醛溶液至单价病毒合并液中，置2-8℃病毒灭活7-10天。
2.3.5浓缩和纯化
2.3.5.1浓缩
超滤浓缩灭活的单价病毒合并液，浓缩后的病毒液血凝效价应不低于1:40240。
2.3.5.2纯化
超滤浓缩后的病毒液可采用柱色谱法或蔗糖密度区带离心法进行纯化，采用后一种方法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖，纯化后的病毒液经除菌过滤，即为单价原液。
2.3.6保存
单价原液应置2-8℃保存。
2.3.7单价原液检定
2.4半成品
2.4.1配制
根据各单价病毒原液血凝素滴度，分别按比例混合后，进行适当稀释，加入硫柳汞作为防腐剂，即为疫苗半成品。
2.4.2半成品检定
按3.2项进行。
2.5成品
2.5.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3规格
每瓶 0.5ml、10ml。每1次人用剂量为0.5ml、1.0ml，含各流感病毒株血凝素应不低于15μg。
2.5.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1单价原液检定
3.1.1鉴别试验
用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验或单向免疫扩散试验（方法见3.1.3项），结果证明抗原性与推荐病毒株相一致。
3.1.2病毒灭活验证试验
将原倍及101 倍、102 倍稀释的病毒液分组接种鸡胚尿囊腔，每组接种10个9-11日龄鸡胚，每胚接种0.2ml，置33-35℃培养72/小时。24小时内死亡的不计数，每组鸡胚须至少存活80%。自存活的鸡胚中每胚取0.5ml尿囊液，按组混合后，再盲传一代，每组各接种10个胚，每胚接种0.2ml，经33-35℃培育72小时后，取尿囊液进行血凝试验，结果应不出现血凝反应（该项检测亦可在单价病毒合并液天活后进行）。
3.1.3血凝素含量
采用单向免疫扩散试验检测血凝素含量。
将标准抗原和原液分别加入到含有标准抗体的1.5%琼脂糖凝胶板上，孔径为3mm，每孔10μI，2025℃放置至少18小时左右。用PBS浸泡1小时后，干燥、染色、脱色。准确测量标准抗原和原液形成的沉淀坏直径，以标准抗原形成的沉淀环的直径对其相应抗原浓度进行直线回归，求出直线回归方程，代人原液的沉淀环直径，即可得到原液的血凝素含量，应不低于9μg/（株·ml）。
3.1.4无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2半成品检定
3.2.l游离甲醛含量
应不高于50μg/剂（附录Ⅵ L）。
3.2.2硫柳汞含量
应不高于50μg/剂（附录Ⅶ B）。
3.2.3血凝素含量
按3.1.3项进行，血凝素含量应不低于15μg/（株·剂）。
3.2.4无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
用相应（亚）型特异性免疫血清进行单向免疫扩散试验，结果应证明抗原性与推荐病毒株相一致。
3.3.2外观
应为微乳白色液体，无异物。
3.3.3装置
按附录Ⅰ A中装量项进行，应不低于标示量。
3.3.4化学检定
3.3.4.1 pH值
应为6.8-8.0（附录Ⅴ A）。
3.3.4.2硫柳汞含量
应不高于50μg/剂（附录Ⅶ B）。
3.3.4.3总蛋白质含量
应不高于300μg/剂（附录Ⅵ B第二法），并不得超过疫苗中血凝素含量的6倍。
3.3.5血凝素含量
按3.1.3项进行，血凝素含量应不低于15M（株·剂）。
3.3.6卵清蛋白含量
采用酶联免疫法（仲裁方法）或对流免疫电泳方法检测，卵清蛋白含量应不高于1000ng/剂。
3.3.7无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.8异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
3.3.g细菌内毒素检查
应不高于100EU/剂（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自血凝素含量检定合格之日起，有效期为三年。
5使用说明
流感全病毒灭活疫苗使用说明
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