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中国药典2005版收载品种：口服福氏宋内菌痢疾双价活疫苗
名称:
口服福氏宋内菌痢疾双价活疫苗
汉语拼音:
Koufu Fushi Songneijun Liji Shuangjia Huoyimiao
英文名:
Dysentery Vaccine（Live）of S.flexneri and S.sonnei，Oral
药物组成:
本品系用表达福氏2a和宋内志贺菌双价菌体抗原的FS菌株，经培养收集菌体后，加入稳定剂冻干制成。
用途:
用于预防细菌性痢疾。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、水、原料及辅料、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 菌种名称及来源
生产用菌种系用生物工程技术构建的、能表达福氏2a和宋内志贺菌菌体抗原的FS菌株。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批的传代
菌种自开启后传代应不超过5代。
2.1.4 种子批菌种的检定
2.1.4.1 培养特性及染色镜检
FS株在固体琼脂上培养后生长呈无色半透明光滑的菌落，涂片染色镜检应为革兰阴性杆菌。
2.1.4.2 生化反应
发酵葡萄糖、甘露醇，迟缓发酵半乳糖，但不产气；不发酵乳糖、麦芽糖、蔗糖；无动力（附录ⅪⅤ）。
2.1.4.3 血清学试验
(1）玻片凝集试验
取35-37℃培养18-20小时的培养物，与相应的福氏志贺菌群3、4，Ⅱ型参考血清和宋内志贺菌Ⅰ相参考血清，分别进行玻片凝集试验，均应在1分钟内出现凝集反应。
(2）定量凝集试验
取35-37℃培养18-20小时的培养物，以灭菌PBS（pH7.2-7.4）稀释成1.0×109/ml，分别与福氏志贺菌群3、4,Ⅱ型参考血清和宋内志贺菌Ⅰ相参考血清做定量凝集试验，充分混合后置35-35℃过夜，肉眼可见凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价，凝集效价应不低于参考血清原效价之半。
2.1.4.4 豚鼠角结膜毒力试验
选用体重300-350g豚鼠（Hartely）2只，取35-37℃培养18-20小时的菌苔一接种环（直径3mm，约含5×1010个活菌）涂布于豚鼠角结膜，连续观察7日，不得出现任何炎症反应。
2.1.4.5 免疫力试验
选用体重14-16g小鼠40只，分为4组，每组10只，其中两组为免疫组，每只皮下注射总菌2.5×1O9，另两组为生理氯化钠溶液对照组。共注射3次，每次间隔3天。于本次注射后第14天，用福氏2a和宋内志贺菌菌株50LD50，分别攻击免疫组和对照组各一组，观察3天，保护率应大于70％。
2.1.4.6 免疫原性试验
将FS株接种于厚金格尔（简称厚氏）斜面或其他适宜培养基，35-37℃培养18-20小时，刮取菌苔于灭菌的PBS（pH2-7.4）中，稀释至一定浓度，经耳静脉免疫体重2kg左右的家兔3只，每次0.5ml，免疫4次，间隔5-7天，4次注射的剂量分别含菌及2.5×108、5.0×108。1.0×109、2.0×109，于末次注射后10-14天采血做定量凝集试验，测血清抗体效价。免疫血清对福氏2a型志贺菌的凝集效价不低于1:1280，对宋内志贺菌效价应不低于1:320，2/3家兔血清之凝集效价达到上述要求即为合格。
2.1.4.7 质粒DNA检测
用Kado-Liu法提取FS培养物的质粒DNA，经0.8％琼脂糖凝胶电泳法检测应呈该菌株典型的质粒图谱。应有分子质量为49MD（百万道尔顿）和74MD的两条大质粒带及另两条小质粒带。
2.1.5 菌种保存
菌种应冻干保存于2-8℃。
2.2 原液
2.2.1 生产用种子
工作种子批菌种检定合格后可使用2年，但每次生产前必须检查全部特性，合格后方可使用。
启开冻干工作种子批菌种，用灭菌PBS（pH7.2- 7.4）或厚氏肉水复苏后铺种厚氏斜面或接种厚氏液体培养基，置35-37℃培养18-20小时；第2-3代菌种采用厚氏液体培养基，35-37℃培养6-8小时。由此制备生产用种子。
2.2.2 生产用培养基
采用厚氏液体培养基或其他适宜培养基。
2.2.3 菌种接种和培养
将纳菌检查合格后的种子液接种于培养罐内，初始浓度达4×108/ml以上为宜，35-37℃培养8-11小时。培养过程中应取样镜检，发现污染即废弃。
2.2.4 收获
在细菌对数生长期末时收获菌体，离心后将菌体混悬于已灭菌的稳定剂中。
2.2.5 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
将混悬于稳定剂中的浓菌液，用含5％蔗糖、0.5％明胶的磷酸缓冲液稀释至1.0×1011/ml。可用单批原液或多批原液混合配制。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装及冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后立即冻干，冻干过程中制品温度不超过30℃。干燥完毕后立即进行真空或充氮封口。
2.4.3 规格
每瓶1ml。含菌1.0×1O11，其中活菌数应不低于2.O×1010。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 纯菌检查
供试品接种于厚氏斜面，于35-37℃培养48小时，应无杂菌生长。
3.12 浓度测定
按“中国细菌浊度标准”测定浓度。
3.2 半成品检定
3.2.1 纯菌检查
同3.1.1项。
3.2.2 活菌率测定
根据“中国细菌浊度标准”比浊浓度将供试品稀释至总菌1.0×1011/ml，采用平皿计数法检测活菌数，活菌率应不低于25％。
3.3 成品检定
除水分测定外，应按制品标示量加入灭菌PBS（pH7.2-7.4），复溶后进行其余各项检定。
3.3.1 鉴别试验
将本品接种厚氏斜面，置35-37℃培养18-20小时后，取菌苔分别用福氏志贺菌群3、4及Ⅱ型血清和宋内志贺菌Ⅰ相血清做玻片凝集试验，应出现明显凝集反应。
3.3.2 外观
应为乳白色或淡黄色的疏松体，加入灭菌PBS后应在1分钟内溶解。
3.3.3 水分
应不高于3.0％（附录Ⅶ D）。
3.3.4 纯菌检查
同:3.1.1顶。
3.3.5 活菌数测定
采用平皿计数法检测活菌数，应不低于2.0×1010/ml。
3.3.6 免疫原性试验
取本品1瓶复溶后，接种于厚氏斜面，置35-37℃培养18-20小时，刮取菌苔于灭菌PBS（pH7.2-7.4），按2.1.4.6项进行。每10批制品抽检1批进行本试验。
3.3.7 豚鼠角结膜毒力试验
按2.1.4.4项进行。
3.3.8 安全试验
选用体重18-22g小鼠5只，并分别称重；每只灌服1.0/1010的菌量，观察7天，小鼠应健存、体重增加。如不符合上述要求，可用10只小鼠复试1次。
3.4 稀释剂检定
每袋稀释剂含碳酸氢钠0.1-O.2、维生素C钠盐0.05-0.1g、糖蜜素0.05-0.1g。加灭菌注射用水50ml溶解后测定。
3.4l pH值
PH应为75-85（附录ⅤA）。
3.4.2 微生物限度检查
依法检查（附录Ⅻ G），应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自检定合格之日起有效期为1年。
5 使用说明
口服福氏宋内菌痢疾双价活疫苗使用说明
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