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中国药典2005版收载品种：甲型肝炎减毒活疫苗
名称:
甲型肝炎减毒活疫苗
汉语拼音:
Jiaxing Gannyan Jiandu Huoyimiao
英文名:
Hepatits A Vaccine，Live
药物组成:
本品系用中型肝炎（简称甲肝）病毒减毒株接种人二倍体细胞，经培养、收获、提纯病毒制成。
用途:
用于预防甲型肝炎。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2制造
2.1生产用细胞
生产用细胞为人二倍体细胞（KMB17株或2As株）。
2.1.1细胞库管理及检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
取自问批上作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。
KMB17株原始细胞库细胞世代应控制在第6代以内，上细胞库细胞世代应控制在第15代以内，工作细胞库细胞世代应控制在第45代以内；2BS株原始细胞库细胞世代应控制在第14代以内，主细胞库细胞世代应控制在第31代以内，工作细胞库细胞世代应控制在第小44代以内。
2.1.2细胞制备
取出冻存的工作细胞库中的1支或多支细胞管，复苏门混合培养，成单层后，用适宜浓度的胰蛋白酶消化，于37℃±0.5℃静置或旋转培养。
2.2毒种
2.2.1名称及来源
生产用毒种为甲型肝炎病毒H2。减毒株或L-A-l减每株。
2.2.2种于批的建立
应符令“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
疫苗生产应基于病毒种子批系统，H2减毒株毒种生产的疫苗应个超过第15代；L-A-l减毒株毒种生产的疫苗应不超过第27代。
2.2.3种于批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种于批应至少进行2.2.3.1-2.3.4项检定。
2.2.3.1鉴别试验
用甲型肝炎病毒特异高效价免疫血清及甲型肝炎阴性血清分别与500-1000 CCID50/ml甲型肝炎病毒等量混合.置 37℃水浴60分钟，接种人二倍体细胞，35℃培养至病毒增殖高峰期，提取培养物后用酶联免疫法测定.经中和的培养物甲型肝炎病毒应完全中和，未经中和的病毒液应测定为甲型肝炎病毒。
2.2.3.2病毒滴定
取毒种做10信系列稀释，至少3个稀释度，分别接种人二倍体细胞，置35℃培养至病毒增殖高峰期，收获后提取甲型肝炎病毒，用酶联免疫法进行病毒液定，应不低于6.50 lg CCID50/ml。
2.2.3.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.2.3.4支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
2.2.3.5病毒外源因于检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规 定。
2.2.3.6免疫原性检查
采用土种子批毒种制备的原疫苗，按常规接种甲型肝炎易感者至少40名，分别于免疫前及免疫后6-8周采血，血清抗体阳转率应不低于90%
2.2.3.7猴体安全及免疫原性试验
用主种子批毒种制备的疫苗做猴体试验。取甲型肝炎病毒抗体阴性、丙氨酸氨基转移酶指标正常、体重为1.5-4.5kg的健康恒河猴或红面猴5只.于下肢静脉注射疫苗1.0ml，满度应不低于6.5O lg CCID50/ml。试验猴子第0周、第4周、第8周肝穿刺做组织病理检查。于第0周、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲型肝炎病毒抗体。应设2只猴为阴性对照。
试验组符合下一步列情况者判为合格:
(1)至少4只猴抗体阳转；
(2)血清丙氨酸氨基转移酶有一过性（1周次）升高者不超过2只猴；
(3）肝组织无与接种供试品有关的病理改变。
有卜列情况之一者可重试:
(1)接种猴抗体阳转率低于4/5；
(2)抗体阳转前后2周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过2次；
(3）试验猴不能排除其他原因所致的肝组织病理改变。
重试后仍出现上述情况之一者，判为不合格。
2.2.4毒种保存
毒种应置-60℃以下保存。
2.3原液
2.3.1细胞制备
同2.1.2项。
2.3.2培养液
培养液为含适量天能新生小牛血清的MEM或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。
2.3.3对照细胞病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.3.4病毒接种和培养
取工作种子毒种按一定比例稀释，接种于人二倍体细胞.于35℃±0.5℃培养至病毒增殖高峰期，用不少于原培养液量的洗液洗涤细胞表面，换加维持液或其他适宜的液体。
2.3.5病毒收获
含甲型肝炎病毒的细胞收获液经冻融和（或）超声波处理收获病毒后，用三氯甲烷抽提以提纯病毒。
2.3.6原液合并
同一细胞批生产的多次病毒收获液，经提纯后可在严格无菌条件下合并为一批原液。
2.3.7原液检定
按3.1项进行。
2.4半成品
2.4.1配制
根据病毒滴度可适当稀释原液，并加入适量稳定剂，即为半成品。
2.4.2半成品检定
按3.2项进行。
2.5成品
2.5.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3规格
每瓶为1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 lg CCID50。
2.5.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1病毒滴定
按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于7.00 lg CCID50/ml。
3.1.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.3支原体检查
依法检查（附录Ⅻ H），应符合规定。
3.2半成品检定
3.2.1无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2.2三氯甲烷残留量
应不高于0.1%（附录Ⅵ O）。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
采用酶联免疫法，应证明为甲型肝炎病毒抗原。
3.3.2外观
应为澄明液体，无异物。
3.3.3病毒滴定
取疫苗3-5瓶混合滴定，按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.50lg CCID50/ml。
3.3.4热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验，应与病毒滴定同时进行。于37℃放置48小时后，按2.2.3.2 项进行，病毒滴度下降应不高于0.50 lg。
3.3.5牛血清白蛋白残留量
采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50 ng/剂。
3.3.6无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.7异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自病毒滴度检定合格之日起，有效期为5个月。
5使用说明
甲型肝炎减毒活疫苗使用说明
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