冻干甲型肝炎减毒活疫苗-中国药典2005版-药典在线

生物制品制备: 1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。 2制造 2.1生产用细胞生产用细胞为人二倍体细胞（KMB17株或2BS株）。 2.1.1细胞库管理及检定应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 KMlll7株原始细胞库细胞世代应控制在第6代以内.主细胞库细胞世代应控制在第15代以内，工作细胞库细胞世代应控制在第45代以内；2BS株原始细胞库细胞世代应控制在第14代以内，生细胞库细胞世代应控制在第31代以内，工作细胞库细胞世代应控制在第44代以内。 2.1.2细胞制备取工作细胞库中的1支或多支细胞管，复苏后混合培养，成单层后，用适宜浓度的胰蛋白酶消化，置37℃士0.5℃静置或旋转培养。 2.2毒种 2.2.1正名称及来源生产用毒种为甲型肝炎病毒N2减毒株或L-A-1减毒株。 2.2.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。 H2减毒株原始种子批传代应不超过第7代，主种于批应不超过第8代，工作种子批应不超过第14代；L-A-I减毒株原始种子批传代应不超过第17代，主种子批应不超过第18代，工作种子批应不超过第26代。 2.2.3种子批毒种的检定主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定。 2.2.3.1鉴别试验用甲型肝炎病毒特异高效价免疫血清及甲型肝炎阴性血清分别与500-1000CCID50/ml甲型肝炎病毒等量混合，置37℃水浴60分钟，接种人二倍体细胞，置35℃培养至病毒增殖高峰期，提取培养物后用酶联免疫法测定，经中和的培养物甲型肝炎病毒应完全中和，未经中和的病毒液应测定为甲肝病毒。 2.2.3.2病毒滴定取毒种做10倍系列稀释，至少3个稀释度，分别接种人二倍体细胞，置35℃培养至病毒增殖高峰期，收获后提取甲型肝炎病毒，用酶联免疫法进行病毒滴定，病毒液度应不低于6.50 lg CCID50/ml。 2.2.3.3无菌检查依法检（附录Ⅻ A），应符合规定。 2.2.3.4文原体检查依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。 2.2.3.5病毒外源因子检查依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。 2.2.3.6免疫原性检查用主种于批毒种制备原疫苗，按常规接种甲型肝炎易感者至少40名，分别于免疫前及免疫后6-8周采血，血清抗体阳转率应不低于90%。 2.2.3.7猴体安全及免疫原性试验用主种子批毒种制备的疫苗做猴体试验。取甲型肝炎病毒抗体阴性、丙氨酸氨基转移酶指标正常、体重为1.5-4.5kg的健康恒河猴或红面猴5只，于下肢静脉注射疫苗1.0ml，滴度应不低于6.50 lg CCID50/ml。试验猴于第0周、第4周、第8周肝穿刺做组织病理检查。于第0周、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲型肝炎病毒抗体。应设2只猴为阴性对照。试验组符合下列情况者判为合格: (1)至少4只猴抗体阳转； (2)血清丙氨酸氨基转移酶有一过性（1周次）升高者不超过2只猴； (3）肝组织无与接种供试品有关的病理改变。有下列情况之一者可重试: (1)授接种猴抗体阳转率低于4/5； (2)抗体阳转前后2周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过2次； (3）试验猴不能排除其他原因所致的肝组织病理改变。重试后仍出现上述情况之一者，判为不合格。 2.2.4毒种保存毒种应置-60℃以下保存。 2.3原液 2.3.1细胞制备同2.1.2.1项。2.3.2培养液培养液为含适量灭能新生小牛血清的MEM或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。 2.3.3照细胞病毒外源因子检查依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。 2.3.4病毒接种和培养取工作种子批毒种按一定比例稀释，接种于人二倍体细胞，于35℃±0.5℃培养至病毒增殖高峰期，用不少于原培养液量的洗液充分洗涤细胞表面，换加维持液或其他适宜的液体。 2.3.5病毒收获含甲型肝炎病毒的细胞收获液经冻融和（或）超声波处理收获病毒后，用三氯甲烷抽提以提纯病毒。 2.3.6原液合并同一细胞批生产的多次收获液，经提纯后可在严格无菌条件下合并为一批原液。 2.3.7原液检定按3.1项进行。 2.4半成品 2.4.1配制根据原液病毒滴度可适当稀释，并加入适量稳定剂，即为半成品。 2.4.2半成品检定按3.2项进行。 2.5成品 2.5.1 分批应符合“生物制品分批规程”规定。 2.5.2分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.5.3规格复溶后每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 lg CCID50。 2.5.4包装应符合“生物制品包装规程”规定。 3检定 3.1原液检定 3.1.1病毒滴定按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于7.00lg CCID50/ml。 3.1.2无菌检查依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。 3.1.3支原体检查依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。 3.2半成品检定 3.2.1无菌检查依法检查（附录孤A），应符合规定。 3.2.2三氯甲烷残留量应不高于0.1%（附录Ⅵ O）。 3.3成品检定除水分测定外，按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行以下各项检定。 3.3.1鉴别试验采用酶联免疫法进行测定，应为甲型肝炎病毒抗原。 3.3.2外观应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物。 3.3.3水分应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。 3.3.4病毒滴定取3-5瓶疫苗供试品混合滴定，按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.50 lg CCID50/ml。 3.3.5热稳定性试验疫苗出厂前应进行热稳定性试验，应与病毒滴定同时进行。于37℃放置72小时后，按2.2.3.2项进行，病毒滴度下降应不高于0.50 lg。 3.3.6牛血清白蛋白残留量采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂。 3.3.7无菌检查依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。 3.3.8异常毒性检查依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。 4保存、运输及有效用于2-8℃避光保存和运输。自病毒滴度检定合格之日起.有效期为1年6个月。 5使用说明冻干甲型肝炎减毒活疫苗使用说明