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中国药典2005版收载品种：布氏菌纯蛋白衍生物
名称:
布氏菌纯蛋白衍生物
汉语拼音:
Bushijun Chundanbai Yanshengwu
英文名:
Purified Protein Derivative of Brucellin（BR-PPD）
药物组成:
本品系用布氏菌经培养、杀菌、过滤除去菌体后纯化制成，
用途:
用于布氏病的临床诊断、布氏菌苗接种对象的选择及布氏菌苗接种后机体免疫反应的监测。
中西药分类:
生物制品--体内诊断类
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
布氏菌纯蛋白衍生物（BP-PPD）生产车间必须与其他生物制品生产车间及实验室分开，原液生产全部过程，包括布氏杆菌的灭活，应在完全隔离的区域内进行，所需设备及器具均须单独设置并专用。直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗及灭菌处理。
2制造
2.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1菌种名称及来源
生产用菌种为猪布氏菌Ⅰ型CMCC 55007（S2）菌株。
2.1.2种子批建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3种子批的传代
自工作种子批至菌体收集，菌种传代不应超过12代。
2.1.4种子批的检定
2.1.4.1染色镜检
菌体染色后镜检应为革兰明性小杆菌。
2.1.4.2生化特性
1:100O三胜黄素做变异检查应为阴性；在硫堇培养基能生长；在碱性复红培养基不生长；培养生长中可产生明显的硫化氢，不需二氧化碳。
2.1.4.3血清学特性
生产用菌种对布氏菌参考血清的凝集效价应达到1:800（＋＋）以上。
2.1.4.4噬菌体裂解特性
能被布氏菌Wb噬菌体裂解。
2.1.5种子批的保存
冻干菌种子2-8℃保存，液体菌种于-70℃以下保存。
2.2原液
2.2.1生产用培养基
采用肝浸液琼脂培养基或经批准的其他培养基。
2.2.2菌种接种和培养
启开菌种后接种于肝琼脂斜面培养基，置37℃培养2-3天，根据生长情况，可在肝琼脂斜面上再传代1次.生长良好的菌答，可供大量接种使用。
2.2.3大量接种
取2.2.2项生长良好的菌苔，接种于适量的大管肝斜面或克氏瓶中作为种子，置37℃培养2天。用以接种的大管肝斜面或肝琼脂克氏瓶，于37℃培养2天。
2.2.4杀菌和除菌
培养终止，以生理氯化钠溶液洗脱培养物，121℃30分钟杀菌，杀菌后离心除去菌体，收集上清液。
2.2.5上清液收集和保存
收集上清液进行纯化。如上清液需保存应加入30g/L苯酚或其他适宜的防腐剂，保存于4-8℃，保存期不超过30天。应防止冻结。
2.2.6纯化
用三氯乙酸和炮和硫酸铵法分别沉淀蛋白质，采用经批准的方法纯化，除菌过滤后即为原液。
2.2.7合并及冻干
2.2.7.1合并
将不超过5次纯化的原液进行合并。
2.2.7.2分装及冻干
原液检定合格后，可根据蛋白质含量，将原液稀释至规定浓度，定量分装，分装后立即进行冻干。
2.2.8原液检定
按3.1 项进行。
2.2.9原液保存及有效期
原液应保存于2-8℃。液体原液自效价测定合格之日起有效期为5年；冻干品目效价测定合格之日起，每间隔5年应按3.1项进行检定，合格后方可继续使用。
2.3半成品
2.3.1配制
经检定合格的原液，用外0.01mol/L PBS（pH7.2-7.4，含队0.005%聚山梨酯80及3.Og/L苯酚）稀释至20IU/ml或50IU/ml。稀释时应充分摇匀，并逐瓶抽样做无菌检查（附录Ⅻ A）。
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3规格
每瓶.1ml、2ml。每1次人用剂量0.1ml，含BR-PPDIU。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1外观
原液冻干品应为白色疏松体。液体原液及冻干品复溶后应呈棕黄色澄明液体，无不溶物或杂质。
3.1.2复溶时间
冻干品按标示量加人注射用水后，应于3分钟内完全溶解。
3.1.3水分
应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。
3.1.4纯度
3.1.4.1蛋白质含量
依法测定（附录Ⅵ B第一法）。
3.1.4.2多糖与核酸含量
每1mg蛋白质含多糖与核酸总量应不高于0.1mg。
(1）多糖含量测定:以生理氯化钠溶液稀释无水葡萄糖标准品，制备0-100μg/ml标准葡萄糖溶液。将硫酸225ml加入到75ml生理氯化钠溶液中，另称取急酮0.6g加入10ml乙醇中，将上述溶液混合，配制成直酮混合液。分别精确量取1.0ml不同浓度标准葡萄糖溶液以及本品，加入4.0ml意酮混合液，混匀，沸水浴20分钟后于波长620nm处测定吸光度，以葡萄糖标准溶液浓度对应其吸光度，用minitab或其他统计学方法求回归方程，代入本品吸光度，计算多糖含量。
(2)核酸含量测定:取供试品2-3ml，采用紫外-可见分光光度法（附录Ⅱ A），于波长260nm处测定吸光度值，按E1%/1cm=200计算核酸含量。
3.1.5效价测定
3.1.5.1动物法
将标准品及本品分别稀释3个不同稀释度，取至少4只已经布氏菌致敏的体重为400-600g的白色雌性豚鼠，去毛后于背部脊柱两侧相对部位，分别皮内注射上述稀释度本品各0.1ml或0.2ml，于注射后24小时、48小时各观察局部硬结的纵径与横径（可根据48小时的反应结果判定）。计算每个稀释度2天的硬结反应总和或平均面积，并求其比值，每个稀释度本品与相应浓度标准品的比值应为0.8-1.2，如不符合上述要求，可调整稀释度后再测定效价，直至符合要求。
3.1.5.2稀释度选择
稀释度的选择应能使本品注射后24小时所产生的局部硬结反应直径为10-30mm；本品和标准品的反应直径大小应相似，且本品和标准品的3个稀释度的剂量对数反应线应基本平行。如本品效价与标准品效价不一致，可用同样方法复试1次，并算出相当于标准品的效价，进行调整，调整后再重新抽样测定效价，直至符合要求。
3.1.6无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.7异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
3.1.8致敏效应试验
试验组与对照组分别用体重300-400g未做过任何试验的豚鼠各3只。试验组每只豚鼠皮内注射0.2ml含20μg的本品，共3次，每次间隔5天。在第3次注射后15天，试验组与对照组每只豚鼠各皮内注射0.2ml含20μg的本品，连续观察3天，两组动物反应应无明显区别。
3.2半成品检定
无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
取已经布氏菌致敏的豚鼠至少4只，皮内注射0.2ml本品，注射后24小时本品的平均硬结反应均应不小于5mm。
3.3.2外观
应为无色澄明液体，无不溶物或杂质。
3.3.3化学检定
3.3.3.1 pH值
应为6.8-7.4（附录Ⅴ A）。
3.3.3.2苯酚含量
应不高于3.0g/L（附录Ⅵ M）。
3.3.4效价测定
取已经布氏菌致敏的400-600g豚鼠，皮内注射0.2ml标准品与本品，至少各4只，注射后24小时、48小时各观察结果1次（可根据48小时的反应结果判定）。计算本品和标准BR-PPD的平均硬结反应（纵横直径相加除以 2），计算累计值，并求其比值，应为0.8-1.2。
3.3.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.6异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F），应符合规定。
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输。自分装之日起有效期为1年。
5使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定。
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