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中国药典2005版收载品种：A群脑膜炎球菌多糖疫苗
名称:
A群脑膜炎球菌多糖疫苗
汉语拼音:
A Qun Naomoyanqiujun Duotang yimiao
英文名:
Group A Meningococcal Polysaccharide Vaccine
药物组成:
本品系用 A 群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。
用途:
用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1菌种名称及来源
生产用菌种为 A 群脑膜炎奈瑟菌CMCC 29201（A4）菌株。
2.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.l.3种子批的传代
主种子批启开后传代次数不得超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。
2.1.4种子批菌种的检定
2.1.4.1培养特性及染色镜检
菌种接种于含10%羊血普通琼脂培养基，脑膜炎球菌在 25℃不生长。于35-37℃二氧化碳的环境中培养16-20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取下，在生理氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。染色镜检应为革兰阴性双球菌、单球菌。
2.1.4.2生化反应
发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气;不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖（附录ⅪⅤ）。
2.1.4.3血清凝集试验
取经 35-37℃培养16-20小时的菌苔，混悬于含0.5%甲醛的生理氯化钠溶液中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌 1.0×109-2.0×109,与同群参考血清做定量凝集反应，置 35-37℃过夜，次日再置室温2小时观察结果，以肉眼可见清晰凝集现象（＋）之血清最高稀释度为凝集反应效价，必须达到血清原效价之半。
2.1.5种子批的保存
原始种子批和主种子批应冻干保存于2-8℃。
2.2原液
2.2.1生产用种子
启开工作种子批菌种，经适当传代，经检定合格后，接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基,制备数量适宜的生产用种子。
2.2.2生产用培养基
采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基漠化铵能形成沉淀的成分。
2.2.3培养
采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰染色镜检,如发现污染杂菌，应废弃。
2.2.4收获及杀菌
于对数生长期的后期或静止期的前期中止培养，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查,合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌,或采用加热方法杀菌。以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。
2.2.5纯化
2.2.5.1去核酸
将已杀菌的培养液（单批或多批混合）离心后收集上清液, 加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀.形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最终浓度为1mol/L，使多糖与十六烷基三甲基漠化铵解离；加入乙醇至最终浓度为25%，2-8℃静置1-3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。
2.2.5.2沉淀多糖
于上述上清液中加入冷乙醇至最终浓度为80%,充分振摇。离心收集沉淀，用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，沉淀物即为多糖粗制品。应保存在-20℃以下，待纯化。
2.2.5.3多糖纯化
将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10-20mg/ml；按1:2容量用冷酚（100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和醋酸钠溶液）提取数次，离心收集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析，加入乙醇至终浓度为75%-80%；离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用灭菌注射用水溶解沉淀物，即为纯化多糖原液。提取过程应尽量在15℃以下进行。
2.2.6原液检定
纯化多糖原液除菌过滤后，取样按3.1项进行。
2.2.7保存及有效期
于-20℃以下保存，自多糖粗制品制造之日起有效期为5年。
2.3半成品
2.3.1配制
半成品可由单批或多批多糖原液合并后，用无菌无热原乳糖和灭菌注射用水稀释制成。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg，乳糖2.5-3.0mg.
2.3.2半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装及冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。冻干过程中制品温度应不高于30℃，真空或充氮封口。
2.4.3规格
每瓶含多糖 150μg、300μg每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1鉴别试验
采用免疫双扩散法（附录Ⅷ C）,本品与 A 群脑膜炎球菌抗体应形成明显沉淀线。
3.1.2化学检定
3.l.2.l固体总量
依法测定（附录Ⅶ M）。
3.1.2.2蛋白质含量
应小于10mg/g（附录Ⅵ B第二法）。
3.1.2.3核酸含量
应小于10mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数 E1%/1cm）为 200（附录Ⅱ A）。
3.l.2.4 O-乙酸基含量
应不低于2mmol/g（附录Ⅵ F）。
3.1.2.5磷含量
应不低于80mg/g（附录Ⅶ A）.
3.1.2.6多糖分子大小测定
多糖分子的KD值应不高于0.40,KD值小于0.5的洗脱液多糖回收率应大于65%（附录Ⅷ G）。
3.1.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A）,应符合规定。
3.1.4细菌内毒素检查
应不高于100EU/μg（附录Ⅻ E凝胶限量试验）;也可采用热原检查法（附录Ⅻ D）检查,应符合规定，注射剂量按家兔体重每1kg注射0.025μg多糖。
3.2半成品检定
无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A）,应符合规定。
3.3成品检定
除水分测定外,按制品标示量加入灭菌PBS复溶后进行其余各项检定。
3.3.1鉴别试验
采用免疫双扩散法（附录Ⅻ C）,本品应与A群脑膜炎球菌抗体形成明显沉淀线。
3.3.2外观
应为白色疏松体,按标示量加入PBS应迅速复溶为澄明液体,无异物。
3.3.3化学检定
3.3.3.1水分
应不高于3.0%（附录Ⅶ D）。
3.3.3.2多糖含量
每1次人用剂量多糖含量应不低于30μg.根据 WHO规程规定的计算公式（多糖含量:磷含量为1000:75）,先测定磷含量应不低于2.25μg（附录Ⅶ A）,再计算出多糖含量。
3.3.3.3多糖分子大小测定
每5批疫苗至少抽1批检查多糖分子大小.KD值应不高于0.40,KD值小于0.5的洗脱液多糖回收率应大于65%（附录见Ⅷ G）。
3.3.4无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A）,应符合规定。
3.3.5异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F）,应符合规定.每只豚鼠注射剂量为500μg/ml，每只小鼠注射剂量为100μg/0.5ml.
3.3.6热原检查
依法检查（附录Ⅻ D）,应符合规定.注射剂量按家兔体重每1kg注射0.025μg多糖。
3.4稀释剂检定
稀释剂为无菌无热原PBS.
3.4.1 pH值
应为 6.8-7.2（附录ⅤA）.
3.4.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A）,应符合规定.
3.4.3异常毒性检查
依法检查（附录Ⅻ F）,应符合规定.
3.4.4热原检查
依法检查（附录Ⅻ D）,应符合规定.注射剂量按家兔体重每1kg注射1ml.
4保存、运输及有效期
于2-8℃避光保存和运输,自分装之日起有效期为2年。
5使用说明
A群脑膜炎球菌多糖疫苗使用说明
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